O hormônio antimulleriano e a reserva ovariana: uma revisão integrativa da literatura / The anti-mullerian hormone and the ovarian reserve: an integrative literature review

O hormônio antimulleriano é secretado pelas células da granulosa dos folículos que estão em desenvolvimento no ovário. Por meio da sua dosagem, é possível avaliar a reserva ovariana. A mulher tem seu número máximo de oócitos no perío- do fetal, mas, conforme o tempo passa, existe uma queda do número de células germinativas. Desse modo, para mulheres que têm o desejo de engravidar, a dosa- gem de hormônios e a avaliação da reserva ovariana podem ajudar no processo. O objetivo do estudo foi encontrar evidências na literatura que comprovem que o hormônio antimulleriano é o melhor marcador da reserva ovariana. Para isso, foi realizada uma revisão integrativa, classificada como qualitativa; a busca de da- dos foi realizada no PubMed, utilizando a seguinte palavra-chave: "hormônio anti- mulleriano (HAM)". Foram encontrados oito artigos que abordavam diretamente o tema, e há evidências que corroboram a hipótese de que o hormônio antimulleria- no é um bom marcador da reserva ovariana, sendo necessários mais estudos para determinar a sua superioridade.

The anti-mullerian hormone is secreted by the granulosa cells of follicles that are developing in the ovary. Though its dosage is possible to evaluate the ovarian re- serve. Women have their maximum number of oocytes in the fetal period, but there is a decrease in the number of germinative cells as time goes by. Thus, women that desire to get pregnant can have hormones dosed and the ovarian reserve evalua- ted to help them with this process. The objective of this study was to find evidence in the literature that proves that the anti-mullerian hormone is the best marker of ovarian reserve. For this purpose, an integrative review was conducted, using the key word: "anti-mullerian hormone (AMH)". Eight articles were found on the subject and there is evidence that proves the hypothesis of the anti-mullerian hormone as a good marker, however more studies are needed to determine its superiority.

Morphology and Biochemistry of Ovulation Morfologia e bioquímica da ovulação

Abstract The process of ovulation involves multiple and iterrelated genetic, biochemical, and morphological events: cessation of the proliferation of granulosa cells, resumption of oocyte meiosis, expansion of cumulus cell-oocyte complexes, digestion of the follicle wall, and extrusion of the metaphase-II oocyte. The present narrative review examines these interrelated steps in detail. The combined or isolated roles of the folliclestimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) are highlighted. Genes indiced by the FSH genes are relevant in the cumulus expansion, and LH-induced genes are critical for the resumption ofmeiosis and digestion of the follicle wall. A nonhuman model for follicle-wall digestion and oocyte release was provided.

Resumo O processo de ovulação envolve modificações genéticas, bioquímicas e morfológicas múltiplas e interrelacionadas: suspensão da proliferação das células da granulosa, reinício da meiose do oócito, expansão das células do complexo cumulus-oócito, digestão da parede folicular, e extrusão do oócito. Esta revisão narrativa examina em detalhes cada um desses eventos e os principais genes e proteínas envolvidos. Mais importante, a ação combinada ou isolada do hormônio folículo-estimulante (HFE) e do hormônio luteinizante (HL) é destacada. Detalha-se o papel do HFE na expansão do cumulus e do HL na digestão da parede folicular, permitindo a extrusão do oócito na superfície ovariana. Proveu-se um modelo não humano para explicar a digestão da parede folicular.

Ex vivo retrieval of mature oocytes for fertility preservation in a patient with bilateral borderline ovarian tumor / Recuperação ex vivo de oócitos maduros para preservação da fertilidade em paciente com tumor ovariano borderline bilateral

Abstract We report a case of ultrasound-guided ex vivo oocyte retrieval for fertility preservation in a woman with bilateral borderline ovarian tumor, for whom conventional transvaginal oocyte retrieval was deemed unsafe because of the increased risk of malignant cell spillage. Ovarian stimulation with gonadotropins was performed. Surgery was scheduled according to the ovarian response to exogenous gonadotropic stimulation; oophorectomized specimens were obtained by laparoscopy, and oocyte retrieval was performed ~ 37 hours after the ovulatory trigger. The sum of 20 ovarian follicles were aspirated, and 16 oocytes were obtained.We performed vitrification of 12 metaphase II oocytes and 3 oocytes matured in vitro. Our result emphasizes the viability of ex vivo mature oocyte retrieval after controlled ovarian stimulation for those with high risk of malignant dissemination by conventional approach.

Resumo Relatamos um caso de obtenção ex vivo de óvulos, guiada por ultrassonografia, para preservação da fertilidade em uma mulher com tumor ovariano borderline bilateral, para quem a recuperação transvaginal convencional foi considerada insegura, devido ao aumento do risco de disseminação de célulasmalignas. Foi realizada estimulação ovariana com gonadotrofinas. A cirurgia foi agendada de acordo com a resposta ovariana à estimulação gonadotrófica exógena; após ooforectomia por laparoscopia, ~ 37 horas após a maturação folicular, procedeu-se à recuperação extracorpórea de oócitos. Umtotal de 20 folículos ovarianos foi aspirado e 16 complexos cumulus foramobtidos, resultando na vitrificação de 12 oócitos maduros e de 3 oócitos imaturos amadurecidos in vitro. Nosso resultado enfatiza a viabilidade da recuperação ex vivo de oócitos maduros após estimulação ovariana controlada para mulheres com alto risco de disseminação maligna pela captação oocitária realizada convencionalmente pela via transvaginal.

Técnicas de substituição de DNA mitocondrial para reduzir a transmissão da Síndrome de Leigh / Mitochondrial DNA replacement techniques to reduce Leigh syndrome transmission

A Síndrome de Leigh (SL) é uma doença neuro-metabólica congênita, que faz parte do grupo das encefalopatias fatais, com progressão e morte dentro de 2 anos, em média. A SL é causada por mutações no DNA que causam alterações na geração de ATP celular pelas mitocôndrias. As mitocôndrias contêm seu próprio DNA (mtDNA) e, ao contrário do DNA nuclear, o mtDNA é herdado somente da mãe. Mulheres portadores de mutações causadoras da SL podem vivenciar experiências muito tristes ao tentarem realizar o sonho da maternidade. As técnicas de substituição de mtDNA mutado com mtDNA saudável de doadora, oferecem a essas mulheres a possibilidade de terem uma criança geneticamente relacionada sem a SL. O desenvolvimento e a aplicação clínica de terapias de substituição de mtDNA já são uma realidade, tendo o primeiro bebê gerado a partir da técnica nascido em 2016. Mas será que essas técnicas são seguras? Neste trabalho, revisamos a SL e algumas técnicas de substituição de mtDNA já aplicadas em humanos, que envolvem a transferência de pronúcleos de zigotos ou de fuso acromático de oócitos. Concluímos que, apesar dos resultados promissores, ainda é cedo para assegurar a aplicabilidade clínica de técnicas de substituição de mtDNA em seres humanos. (AU)

Leigh syndrome (SL) is a congenital neurometabolic disease included in the group of fatal encephalopathies, with progression and death within 2 years on average. SL is caused by mutations in the DNA that cause changes in the generation of cellular ATP by mitochondria. Mitochondria contain their own DNA (mtDNA) and, unlike nuclear DNA, mtDNA is inherited only from the mother. Women with SL mutations may experience mournful situations when attempting to fulfill the dream of motherhood. Techniques for replacing mutant mtDNA with healthy donor mtDNA provide these women with the possibility of having a genetically related child without SL. The development and clinical application of mtDNA replacement therapies is a reality, and the first baby generated using the technique was born in 2016. However, are these techniques safe? In this article, we review SL and some mtDNA replacement techniques that have been used in humans, which involve zygote pronuclear transfer or oocyte spindle transfer. We conclude that, despite the promising results, it is too early to ensure that mtDNA replacement techniques are clinically applicable to humans. (AU)

Consumo de agua tratada de producción petrolera en la fertilidad del bovino macho del sistema doble propósito / Consumption of treated water from oil production in male bovine fertility of the double purpose system / Consumo de água tratada na produção de óleo no sistema de dupla finalidade de fertilidade bovina masculina

Resumen El objetivo de este estudio fue evaluar el consumo de agua tratada proveniente de la producción petrolera en la calidad seminal del macho bovino reproductor, para ello se seleccionaron 16 toros entre 4 y 5 años distribuidos en dos grupos en los centros de investigaciones La Libertad de Agrosavia en Villavicencio y el Área de sostenibilidad agroenergetica, ASA en Acacias con disponibilidad de agua tratada de los campos petroleros, Apiay (A) y Castilla (C) respectivamente. Los animales seleccionados fueron distribuidos al azar para cada localidad en 4 tratamientos: 1) Consumo del 100 % agua de producción tratada; 2) consumo de mezcla 50 % agua de producción tratada y 50 % agua cruda; 3) consumo de mezcla 25 % agua de producción tratada y 75 % agua cruda; y 4) consumo 100 % agua cruda. Las variables consideradas fueron: calidad seminal para A y C determinadas por un sistema computarizado y de fertilidad in vitro para A evaluada por tinción fluorescente, Hoechst 33342. Los datos se analizaron estadística descriptiva, análisis de varianza (ANOVA) y pruebas de comparación de medias, Tukey, en un modelo de medidas repetidas en el tiempo. Los resultados indicaron, para calidad seminal, que los tratamientos que consumieron A y C en cada localidad presentaron diferencias (P < 0,05) para motilidad, 75,00±4,50, 69,24±4,13, espermatozoides motiles/100 células evaluadas, en el tratamiento dos respectivamente y en A para morfología, 76,67±2,06 espermatozoides normales/100 en el tratamiento cuatro, el índice de calidad espermática (ICE) no mostró diferencia (P > 0,05). Los resultados de unión espermatozoide - zona pelúcida mostraron diferencias entre tratamientos (P < 0,05), al igual que en fecundación in vitro, sin embargo, el comportamiento de estos cambios no indica asociación con el consumo de este tipo de agua. El estudio muestra que no se observan cambios contundentes o negativos que demuestren efecto en la fertilidad del toro por consumo de agua de producción tratada.

Abstract The objective of this study was to evaluate the consumption of treated water from oil production in the seminal quality of the breeding male; To this end, 16 bulls between 4 and 5 years old were selected, distributed in two groups at Agrosavia's La Libertad centers in Villavicencio and the Agroenergetic Sustainability Area, ASA in Acacias with availability of treated water from the oil fields, Apiay (A) and Castilla (C) respectively. The selected animals were distributed randomly to each location in 4 treatments: 1) Consumption of 100% treated production water; 2) 50% consumption of treated production water and 50% raw water consumption; 3) mixing consumption 25% treated production water and 75% raw water; and 4) 100% raw water consumption. The variables considered were: seminal quality for A and C determined by a computerized system, and in vitro fertility for A evaluated by fluorescent staining, Hoechst 33342. The data were analyzed descriptive statistics, analysis of variance (ANOVA) and means comparison tests, Tukey, in a model of measures repeated over time. The results indicated, for seminal quality, that the treatments that consumed A and C in each locality presented differences (P <0,05) for motility, 75,00 ± 4,50, 69,24 ± 4,13, motile sperm / 100 cells evaluated, in treatment two respectively and in A for morphology, 76,67 ± 2,06 normal sperm / 100 in treatment four, the sperm quality index (SQI) showed no difference (P> 0,05). The results of sperm-pellucid zone binding showed differences between treatments (P <0,05), as in in vitro fertilization, however, the behavior of these changes does not indicate an association with the consumption of this type of water. The study shows that there are no strong or negative changes that show an effect on the fertility of the bull due to the consumption of treated production water.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar o consumo de água tratada da produção de óleo na qualidade seminal do macho reprodutor; Para tanto, foram selecionados 16 touros entre 4 e 5 anos, distribuídos em dois grupos nos centros de La Libertad de Agrosavia em Villavicencio e na Área de Sustentabilidade Agroenergética, ASA em Acacias com disponibilidade de água tratada dos campos de petróleo, Apiay (A ) e Castilla (C) respectivamente. Os animais selecionados foram distribuídos aleatoriamente para cada local em 4 tratamentos: 1) Consumo de água de produção tratada 100%; 2) 50% de consumo de água de produção tratada e 50% de consumo de água bruta; 3) consumo de mistura 25% de água de produção tratada e 75% de água bruta; e 4) 100% de consumo de água bruta. As variáveis ​​consideradas foram: qualidade seminal para A e C, determinada por sistema computadorizado, e fertilidade in vitro para A, avaliada por coloração fluorescente, Hoechst 33342. Os resultados indicaram, para qualidade seminal, que os tratamentos que consumiram A e C em cada localidade apresentaram diferenças (P <0,05) para motilidade, 75,00 ± 4,50, 69,24 ± 4,13, espermatozóides móveis / 100 células avaliadas, no tratamento dois respectivamente e em A para morfologia, 76,67 ± 2,06 espermatozóides normais / 100 no tratamento quatro, o índice de qualidade espermática (IQE) não apresentou diferença (P> 0,05). Os resultados de ligação das zonas pelúcidas de espermatozóides mostraram diferenças entre os tratamentos (P <0,05), como na fertilização in vitro, entretanto, o comportamento dessas mudanças não indica uma associação com o consumo desse tipo de água. O estudo mostra que não há mudanças fortes ou negativas que mostram um efeito sobre a fertilidade do touro devido ao consumo de água de produção tratada.

¿Cuál es el punto de corte más significativo de hormona antimülleriana como predictor de la respuesta ovárica, tasa de embarazo y nacido vivo? / What is the most significant cutting point of antimüllerian hormone as a predictor of the ovarian response, pregnancy rate and living born?

Resumen OBJETIVO: Evaluar la eficacia de la hormona antimülleriana en la predicción de la respuesta ovárica, tasa de embarazo y nacido vivo. MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio retrospectivo, analítico y observacional efectuado para evaluar los ciclos de estimulación ovárica de pacientes atendidas entre el 1 de enero de 2010 y el 30 de junio de 2017 en el Centro de Reproducción Hisparep. Criterios de inclusión: límites de edad 20 y 44 años y tener ciclos menstruales regulares. Criterios de exclusión: factor masculino alterado, cavidad uterina alterada, trastornos endocrinos, antecedente de daño ovárico. Variables de estudio: concentraciones de hormona antimülleriana, ovocitos recuperados, maduros, fecundados, embriones, tasa de embarazo y nacido vivo. Las variables cuantitativas se analizaron mediante una comparación de medias con t de Student, las variables porcentuales mediante comparación de percentiles. RESULTADOS: Se evaluaron 223 ciclos, divididos en grupos según diferentes puntos de corte. En cualquier punto de corte la hormona antimülleriana predice mayor recuperación de ovocitos maduros y fecundados: 1.25 ng/mL fue el punto de corte más significativo porque predijo mayor obtención de embriones. Se observó relación entre las tasas de embarazo clínico y nacido vivo, aunque su poder predictivo fue débil. Tomar como referencia un punto de corte de 0.5 ng/mL parece predecir bajas probabilidades de nacido vivo. CONCLUSIONES: La hormona antimülleriana fue el mejor marcador de respuesta ovárica; el punto de corte más significativo fue el de 1.25 ng/mL. Hacen falta más estudios para evaluar su eficacia como predictor de bajas tasas de nacido vivo.

Abstract OBJECTIVE: To evaluate the efficacy of antimülleriana hormone in prediction of the ovarian response, pregnancy rate and live birth. MATERIALS AND METHODS: In this retrospective, analytical and observational study, ovarian stimulation cycles were evaluated at the Hisparep Reproduction Center, in a period from January 1, 2010 to June 30, 2017, the inclusion criteria were; Age from 20 to 44 years and regular menstrual cycles. The exclusion criteria; altered male factor, altered uterine cavity, endocrine disorders, antecedent of ovarian damage. The study variables; antimüllerian hormone, oocytes recovered, mature, fertilized, embryos, pregnancy rate and live birth. The quantitative variables were analyzed by means of a comparison of means, using the Student's T test, the percentage variables by means of comparison of percentiles. RESULTS: 223 cycles were evaluated, divided into groups using different cut points. It was determined that Antimullerian Hormone predicts a greater recovery of mature and fertilized oocytes using any cut point, we consider that 1.25 ng / mL was the most significant cutoff point, since it predicts higher embryo obtaining, relationship was observed in pregnancy rates clinical and live birth, although its predictive power is weak, however, using a cutoff of 0.5 ng / mL seems to predict low odds of live birth CONCLUSIONS: Antimullerian hormone is the best marker of ovarian response, we consider that 1.25 ng /mL is the most significant cut-off point, more studies are needed to evaluate its efficacy as a predictor of low rates of live birth.

In vitro maturation of collared peccary (Pecari tajacu) oocytes after different incubation times / Maturação in vitro de oócitos de cateto (Pecari tajacu) após diferentes períodos de incubação

Oocyte in vitro maturation (IVM) is the first step of the in vitro reproductive technologies that enables mature oocytes to be generated ex vivo and after used for embryo production. In this sense, the establishment of culture environment, as oocyte incubation time, is essential for the success of the IVM. Therefore, the study was carried out to investigate the relationship between the meiotic potential and the IVM times of collared peccary oocytes, wild mammals of great commercial and ecological interest. Thus, ovaries were collected of females derived from captivity and transported to the laboratory within 1 hour of slaughtering. The oocytes derived from follicles (3-6mm in diameter) were recovered by aspirated and sliced. Good quality oocytes (evenly granulated cytoplasm with a least one layer of surrounding cumulus cells) were selected and subjected to culture in TCM 199 supplemented with 10µg/mL FSH, 10% FBS and 100µM cysteamine at 38.5°C, 5% CO2 and maximum humidity for 24 or 48 hours. After the incubation period, the nuclear status, the presence of first polar body and the expansion of cumulus cells of oocytes were assessed. The data obtained were analyzed by Fisher exact test (P<0.05). A total of four sessions (2-3 females per session) were performed, resulting in eighteen aspirated and sliced ovaries with normal morphological characteristics. An oocyte recovery rate of about 83.1% (59/71) was obtained with 3.3 oocytes/ovary and 2.3 viable oocytes/ovary. After different incubation times, differences (P<0.05) were observed in 24 and 48 hours for expansion of the cumulus cells (38.1% vs. 100%), presence of first polar body (52.4% vs. 90.5%) and nuclear status in second metaphase (19.0% vs. 76.2%), respectively. In conclusion, 48 hours is suitable time for the in vitro maturation of oocytes derived from collared peccaries when compared to the time of 24 hours, according to the meiotic potential observed. Additional studies should be conducted to improve the quality of the oocyte culture environment, as medium composition, aiming to obtain viable mature oocytes for other in vitro biotechnologies.(AU)

A maturação in vitro (MIV) oocitária é a primeira etapa das tecnologias reprodutivas in vitro que permite que oócitos maturados sejam gerados ex vivo e depois usados para a produção de embriões. Nesse sentido, o estabelecimento do ambiente de cultivo, como o período de incubação de oócitos, é essencial para o sucesso da MIV. Portanto, o estudo foi realizado para investigar a relação entre o potencial meiótico e os períodos de MIV de oócitos derivados de catetos, mamíferos silvestres de grande interesse comercial e ecológico. Para tanto, os ovários foram coletados de fêmeas derivadas de cativeiro e transportados ao laboratório dentro de 1 h após o abate. Os oócitos derivados de folículos (3-6mm de diâmetro) foram recuperados por aspiração e fatiados. Oócitos de boa qualidade (citoplasma uniformemente granulado com pelo menos uma camada circundante de células cumulus) foram selecionados e submetidos ao cultivo em TCM 199 suplementado com 10µg/mL de FSH, 10% de SFB e 100μM de cisteamina a 38,5°C, 5% de CO2 e umidade máxima por 24 e 48 h. Após o período de incubação, o estado nuclear, a presença do primeiro corpúsculo polar e a expansão das células do cumulus dos oócitos foi avaliada. Os dados obtidos foram analisados pelo teste exato de Fisher (P<0,05). Um total de quatro sessões (2-3 fêmeas por sessão) foi realizado, resultando em dezoito ovários aspirados e fatiados com características morfológicas normais. Uma taxa de recuperação oocitária de aproximadamente 83,1% (59/71) foi obtida com 3,3 oócitos/ovário e 2,3 oócitos viáveis/ovário. Após diferentes períodos de incubação, diferenças (P<0,05) foram observadas entre 24 e 48 h para a expansão das células cumulus (38,1% vs. 100%), presença de primeiro corpúsculo polar (52,4% vs. 90,5%) e estado nuclear na segunda metáfase (19,0% vs. 76,2%), respectivamente. Em conclusão, 48 h é o período adequado para a maturação in vitro de oócitos derivados de catetos quando comparado ao tempo de 24 h, de acordo com o potencial meiótico observado. Estudos adicionais devem ser conduzidos para melhorar a qualidade do ambiente de cultivo oocitário, como a composição de meio, objetivando obter oócitos maturados viáveis para outras biotecnologias in vitro.(AU)

Shared oocyte donation: ideas and expectations in a bioethical context based on a qualitative survey of brazilian women / Doação compartilhada de oócitos: ideias e expectativas em um contexto bioético com base em um levantamento qualitativo de mulheres brasileiras

Abstract Objective Assisted reproduction combines innovative technologies and new forms of procreation through gamete donation; however, it also leads to moral and ethical issues and to the wide application of referential bioethics. The objective of the present study was to understand the bioethical context of shared oocyte donation. Methods The present qualitative study used the Collective Subject Discourse methodology to interview donors and recipients in Brazil. Results Donors suffer from infertility, and in vitro fertilization opens the possibility of having a child; however, the cost is high, and helping the recipient is more important than the financial cost. The recipients regret delaying motherhood; adopting a child is their last option, and they desire to feel the physical stages of pregnancy. The recipients find the rules unfair regarding the lack of an oocyte bank and the fact that the treatment must be performed in shared cycles; however, oocyte donation makes it possible to realize the common dream of motherhood. Conclusion The obtained data showed that the patients are suffering and frustrated due to infertility, and they realize that in vitro fertilization may be the treatment they need. These women believe that children are essential in the constitution of the family, and scientific advances bring about innovative technologies and new forms of family constitution, with repercussions in the social, economic, political, and family contexts that lead to bioethical questions in Postmodernity.

Resumo Objetivo A reprodução assistida agrega tecnologias inovadoras e novas formas de procriação pormeio da doação de gametas; no entanto, também leva a questões éticas e morais e à ampla aplicação da bioética referencial. O objetivo deste estudo foi compreender o contexto bioético da doação compartilhada de oócitos. Métodos Este estudo qualitativo utilizou a metodologia do Discurso do Sujeito Coletivo para entrevistar doadoras e receptoras no Brasil. Resultados As doadoras sofrem de infertilidade, e a fertilização in vitro abre a possibilidade de ter um filho; no entanto, o custo é alto, e ajudar a receptora é mais importante do que o custo financeiro. As receptoras se arrependem de retardar a maternidade; adotar uma criança é sua última opção, e elas desejam sentir os estágios físicos da gravidez. As receptoras consideramas regras injustas emrelação à falta de um banco de oócitos e ao fato de que o tratamento deve ocorrer emciclos compartilhados; no entanto, a doação de oócitos possibilita a realização do sonho comum da maternidade. Conclusão Os dados obtidosmostraram que as pacientes estão sofrendo e frustradas devido à infertilidade, e percebem que a fertilização in vitro pode ser o tratamento de que necessitam. Essas mulheres acreditam que as crianças são essenciais na constituição da família, e os avanços científicos agregam tecnologias inovadoras e novas formas de constituição familiar com repercussões nos contextos sociais, econômicos, políticos e familiares que levam a questões bioéticas na Pós-modernidade.

Surubim-do-Paraíba oocytes viability after being exposed to different cryoprotectants / Viabilidade de oócitos de surubim do Paraíba após exposição a diferentes crioprotetores

ABSTRACT: To know the non-toxic cryoprotectants to fish oocytes is of extreme importance for tests that aim to increase oocyte resistance to cold, thus allowing more advanced studies in cryopreservation. Therefore, commonly used cryoprotectants such as methanol, dimethyl sulfoxide, ethylene glycol, propylene glycol, sucrose and fructose were studied. Immature oocytes from the initial to vitelogenic (diameter <1.7 mm) and mature (diameter >1.8 mm) stages of Steindachneridion parahybae were evaluated. Four distinct experiments were performed, three using immature oocytes and one using oocytes at the mature stage. For each oocyte stage, the best maintenance solution to be used: Hank or 50% L15 and; viability after baths for 30min (room temperature) at cryoprotectant concentrations ranging from 0.25 to 4M were evaluated. Different tests were used to evaluate oocyte viability: in vitro maturation followed by observation of germinal vesicle breakdown (only for immature oocytes), Trypan Blue staining (all stages) and fertilization and hatching rates (mature stage only). Results showed that the toxic effect of cryoprotectants on oocytes generally increases with increasing concentrations. Sensitivity of oocytes to cryoprotectants increases according to the stage of development, with mature oocytes being more sensitive. Sucrose, fructose, methanol, propylene glycol and dimethyl sulfoxide can be used as cryoprotectants for S. parahybae oocytes.

RESUMO: Conhecer os crioprotetores não tóxicos aos oócitos de peixes é de extrema importância para testes que visam aumentar a resistência dos oócitos ao frio, permitindo, assim, estudos mais avançados em criopreservação. Desta forma, crioprotetores comumente utilizados como o metanol, dimetil sulfóxido, etilenoglicol, propilenoglicol, sacarose e frutose foram estudados. Os oócitos imaturos, nos estágios inicial até vitelogênico (diâmetro <1,7mm), e maduros (diâmetro >1,8mm) de Steindachneridion parahybae foram avaliados. Quatro experimentos distintos foram realizados, sendo três destes utilizando oócitos imaturos, e um usando oócitos no estágio maduro. Para cada estágio oocitários foram avaliados, considerando qual a melhor solução de manutenção a ser utilizada: Hank ou 50% L15 e; viabilidade após banhos por 30min (temperatura ambiente) em concentrações de crioprotetores, variando de 0,25 a 4M. Diferentes testes foram utilizados para avaliar a viabilidade dos oócitos: maturação in vitro seguido por observação da quebra da vesícula germinativa (somente para oócitos imaturos), coloração por Azul de Tripan (todos os estágios) e taxas de fertilização e eclosão (somente no estágio maduro). Os resultados mostraram que o efeito tóxico dos crioprotetores em oócitos geralmente crescem com o aumento das concentrações. A sensibilidade dos oócitos a crioprotetores aumentam de acordo com o estágio de desenvolvimento, com oócitos maduros sendo mais sensíveis. Sacarose, frutose, metanol, propileno glicol e dimetil sulfóxido podem ser usados como crioprotetores para oócitos de S. parahybae.

Reproduction of Megapitaria squalida (Bivalvia: Veneridae) in the Southeast Gulf of California, Mexico / Reproducción de la almeja callista Megapitaria squalida (Bivalvia: Veneridae) en el sureste del Golfo de California, México

AbstractBivalves reproductive cycle varies according to the particular environmental conditions where they are found, and these reproductive details represent basic information for their capture, management and conservation strategies. With this objective, the reproductive cycle of the clam Megapitaria squalida, inhabiting the Southeast of the Gulf of California (Altata Bay, Sinaloa, Mexico), was studied using histology and changes in the number and size of oocytes, from June 2013 to June 2014. Histological analysis of the gonads showed spawning activity throughout the year, with two peaks. The first was registered in October and it was accompanied by the highest decrease of weight; the second was in February with the highest percentage of spawning population; besides, a resting period was observed in December. The sex-ratio (female:male) of the clam population was 1.08:1 (χ2 = 5.72, d.f. = 1, P < 0.05). Mean oocyte size and number were different (P < 0.05) among all sampling months and fluctuated from 34.6 ± 5.8 µm in June 2014, to 41.9 ± 6.8 µm in February 2014, and from 443.8 ± 424.5 in February 2014, to 1 214.4 ± 267.6 counted in April, respectively. With these results we suggest a protection season from October to November, when the most intense release of gametes occur in this population. Rev. Biol. Trop. 65 (3): 881-889. Epub 2017 September 01.

ResumenEl ciclo reproductivo de los bivalvos varía de acuerdo a las condiciones ambientales de cada lugar, y representa información importante para su conservación. Se estudió el ciclo reproductivo de la almeja Megapitaria squalida utilizando cortes histológicos de la gónada y cambios en el número y tamaño de los oocitos, en el sur del Golfo de California (Bahía Altata, Sinaloa, México), desde junio 2013 a junio 2014. El análisis histológico de las gónadas, mostró eventos de desove todo el año con dos picos: el primero fue registrado en octubre acompañado con un fuerte decremento en peso de los animales; el segundo en febrero caracterizado por un alto porcentaje de desove en la población. Se observó un periodo de reposo en diciembre. La proporción sexual (hembras:machos) de la población de almejas fue 1.08:1 (χ2 = 5.72, g.l. = 1, P < 0.05). El número y tamaño promedio de los oocitos mostró diferencias (P < 0.05) entre los muestreos mensuales, y fluctuaron de 34.6 ± 5.8 µm en junio 2014 a 41.9 ± 6.8 µm en febrero 2014, y de 443.8 ± 424.5 en febrero 2014, a 1 214.4 ± 267.6 en abril 2014. Se propone una temporada de veda desde octubre a noviembre, ya que en estos meses la liberación de gametos por la población fue más intensa.

Ovarian histology and fecundity in the evaluation of the reproduction of the invasive species Serrasalmus marginatus (Characidae) on a neotropical floodplain / Histologia ovariana e fecundidade na avaliação da reprodução da espécie invasora Serrasalmus marginatus (Characidae) em uma planície de inundação neotropical

The construction of the Itaipu Hydroelectric Power Plant in 1982 led to the formation of a reservoir, which, in turn, leveled the waters of the Paraná River by flooding the geographic barrier Salto de Sete Quedas. This allowed the piranha Serrasalmus marginatus to invade and colonize the upper Paraná River. This study aimed to: i) confirm, through light microscopy, the reproductive phases of S. marginatus females; ii) estimate fecundity and iii) evaluate the reproduction areas of the population. A total of 764 females were collected from nine sampling sites on the upper Paraná River floodplain. Microscopic analysis of the ovaries showed the following phases: early developing subphase, developing phase, spawning capable phase, actively spawning subphase, regressing phase and regenerating phase. The frequency distribution of the oocytes shows that spawning is fractional and fecundity indeterminate. Fecundity varied from 410 to 752 oocytes (mean = 584). The continual spawning of oocytes during the long reproductive period, as well as the aggressiveness of the species as regards the defense of its offspring, guarantees more descendants in the Patos, Ventura, Fechada, Guaraná and Garças lagoons and Ivinheima and Baia rivers of the upper Paraná River floodplain.

A construção da Usina Hidroelétrica de Itaipu, em 1982, levou a formação do reservatório que por sua vez nivelou as águas do rio Paraná inundando a barreira geográfica do salto de Sete Quedas. Isto permitiu que a piranha Serrasalmus marginatus invadisse e colonizasse o alto rio Paraná. Este estudo teve por objetivos: i) confirmar através da microscopia de luz as fases reprodutivas das fêmeas de S. marginatus; ii) estimar a fecundidade e iii) avaliar as áreas de reprodução da população. Um total de 764 fêmeas foram amostrados em nove estações de amostragem na planície de inundação do alto rio Paraná. A análise microscópica dos ovários mostrou fêmeas nas subfases em desenvolvimento inicial, fase desenvolvimento, fase apto à desova, subfase desova ativa, fase regressão e fase regeneração. A distribuição de frequência dos oócitos mostra que a desova é parcelada e a fecundidade é indeterminada. A fecundidade variou de 410 a 752 e em média 584 oócitos. A desova contínua durante o longo período reprodutivo associado à agressividade em relação à defesa da prole garante o sucesso em deixar mais descendentes nas lagoas dos Patos, Ventura, Fechada, do Guaraná, das Garças, nos rios Ivinheima e Baia da planície de inundação do alto rio Paraná.

Há um momento ideal para uma mulher criopreservar seus oócitos? / Is there an ideal moment for a woman to cryopreserve her eggs?

A criopreservação de oócitos é hoje um procedimento cotidiano em clínicas de reprodução humana para preservação da fertilidade por motivos médicos ou pela simples decisão de adiar a maternidade. Felizmente, já se pode dizer com segurança que a chance de gravidez por fertilização in vitro de oócitos congelados é praticamente a mesma em relação aos gametas frescos. Da mesma forma, a técnica é igualmente segura para a saúde da prole. Entretanto, mesmo sabendo que a idade é um fator importante para o sucesso da preservação da fertilidade, não se pode apostar em um momento ideal para a criopreservação dos oócitos. Já há estudos conduzidos com a intenção de se definir tal momento, mas ainda restam dúvidas e cabe questionamentos acerca de que se os dados existentes hoje são suficientes para tal definição.(AU)

Egg freezing for preservation of fertility is already a routine procedure in centers for assistance in human reproduction, even for medical reasons or for the simple decision to postpone motherhood. Fortunately, one can already safely say that the chance of pregnancy by IVF of frozen eggs is practically the same in relation to fresh eggs. Likewise, the technique is also safe for the health of the offspring. However, even though age is an important success factor for fertility preservation, no one can bet on an ideal time for freezing eggs. Some studies conducted with the intent to define that time are already found in literature, but questions remain and it is up to ask whether data today are sufficient for such a definition.(AU)

What do Infertile Women Think about Oocyte Reception, Oocyte Donation, and Child Adoption? / O que as mulheres inférteis pensam em relação a ovo recepção, doação de oócitos e adoção de crianças?

Abstract Purpose The views of infertile couples regarding oocyte donation by third parties and adoption are unknown, as these may be interpreted as a final closure of the available options for conception. This study aimed to determine the acceptance of oocyte donation, oocyte reception, and child adoption of infertile women who submitted to assisted reproductive technology (ART) treatment Methods Sixty-nine women who were under treatment for infertility and submitted to ART procedures were included in this cross-sectional study. They were evaluated using semi-structured questionnaires administered during ovulation induction in a treatment cycle. Marital status, religion, years of schooling, occupation, type of infertility, age, duration of infertility, number of previous ART cycles, mean oocyte number per cycle, and mean number of embryos per cycle had no influence on a woman's acceptance of oocyte donation or oocyte reception. Results More than 90% of the patients thought that the subject of "adoption" should be brought up during their ART treatments, although they preferred to discuss this topic with psychologists, not doctors. Women with occupations were more willing to consider adoption. Conclusion The opinions of these patients on these issues seem to be based on personal concepts and ethical, religious, and moral values. Women preferred to discuss adoption with psychologists rather than doctors.

Resumo Objetivo Não se sabe ao certo o que os casais inférteis acham sobre doação de óvulos por terceiros e adoção, condições estas que podem ser interpretadas como um encerramento definitivo das opções disponíveis para concepção. Este estudo teve como objetivo determinar a aceitação da doação de oócitos, ovo recepção e adoção de crianças por mulheres inférteis submetidas a tratamento de reprodução assistida (RA). Métodos Sessenta e nove mulheres em tratamento para infertilidade e submetidas a procedimentos de RA foram incluídas neste estudo transversal. Elas foram avaliadas por meio de questionários semiestruturados administrados durante a indução da ovulação em um ciclo de tratamento. Resultados O estado civil, religião, escolaridade, ocupação, tipo de infertilidade, idade, duração da infertilidade, número de ciclos de RA anteriores, o número médio de oócitos por ciclo e de embriões por ciclo médio não tiveram influência sobre a aceitação da doação ou da recepção de oócitos. Mais de 90% das mulheres acha que o tema "adoção" deve ser discutido durante o tratamento de RA, porém preferem discutir este tema com psicólogos, e não com médicos. As mulheres com ocupações foram mais predispostas a considerar a adoção. Conclusão As opiniões destas pacientes sobre estas questões parecem ser baseadas em conceitos pessoais e valores éticos, religiosos e morais. As mulheres preferiam discutir a adopção com psicólogos, em vez de médicos.

Expressão do mRNA para IGF-2 em oócitos e células do cumulus extraídos de folículos antrais e pré-antrais de ovelhas nativas do Estado de Pernambuco / IGF-2 mRNA expression in oocytes and cumulus cells of antral and preantral native sheep follicles in Pernambuco State, Brazil

Objetivou-se avaliar a expressão do mRNA para o gene do fator de crescimento IGF-2 em oócitos e células do cumulus de ovelhas em diferentes estágios do desenvolvimento folicular. Os folículos classificados morfologicamente como antrais (terciários e pré-ovulatórios) foram aspirados manualmente para obtenção dos oócitos e células do cumulus. Os folículos pré-antrais (secundários) foram extraídos do córtex ovariano, por microdissecção, e os oócitos retirados. Nos dois grupos, os oócitos foram desnudados e agrupados em "pools" de dez células cada (Grupo A, n=10; Grupo B, n=10) e dez amostras com grupos de células do cumulus (Grupo A1, n=10, B1, n=10). O mRNA foi extraído e convertido em cDNA utilizando a técnica da RT-PCR, utilizando Oligo DT randômico para o mRNA. A análise da expressão confirmou a expressão gênica para IGF-2 nos grupos de oócitos e células do cumulus. Houve um aumento da expressão relativa do mRNA para IGF-2 nos grupos de oócitos durante a fase mais tardia do desenvolvimento folicular e as diferenças foram consideradas significantes (p<0,05). Não houve variação significante da expressão de IGF2 entre os grupos de células do cumulus. Conclui-se que o fator de crescimento IGF-2 tem níveis mais elevados de expressão em oócitos ovinos, na segunda fase do desenvolvimento folicular, mas expressão semelhante em células do cumulus durante as fases estudadas do desenvolvimento folicular.(AU)

The aim of this study was to analyze the mRNA expression of IGF-2 growth factor in oocytes and cumulus cells from native sheep follicles at different stages of follicular development. The classified morphologically as antral follicles (tertiary preovulatory) were aspirated manually to obtain the oocyte and the cumulus cells. The preantral follicles (secondary) were extracted from the ovarian cortex by microdissection, and oocytes were removed. In both groups, oocytes were denuded and grouped into "pools" of ten cells each (Group A, n=10, Group B, n=10) and ten samples with groups of cumulus cells (Group A1, n=10; B1, n=10). The mRNA was extracted and converted to cDNA using the RT-PCR technique. The expression analysis confirmed the expression of IGF-2 gene for groups of oocyte and the cumulus cells. There was an increase in the relative expression of mRNA for IGF-2 for groups of oocytes during the later stage of follicular development and differences were considered significant (p<0.05). There was no significant variation in the expression of IGF2 between groups of cumulus cells. It is concluded that the growth factor IGF-2 has higher levels of expression in sheep oocytes in the second stage of follicular development in the conditions adopted and similar expression in cumulus cells during various stages of follicular development.(AU)

Crianças nascidas após vitrificação de oócitos em reprodução assistida em hospital público / Infants live born after oocytes vitrification in assisted reproduction public hospital

A criopreservação de oócitos contribuiu para o avanço das técnicas em reprodução humana nas últimas décadas. A metodologia tem sua aplicação na preservação da fertilidade, em programas de ovodoação, como estratégia para redução do número de embriões extranumerários criopreservados com manipulação de menor número de oócitos a fresco e para acúmulo de oócitos em ciclos com reduzida resposta ovariana. A partir do princípio de que todo cidadão tem direito a saúde, é dever do Estado garantir o acesso a todos os tipos de tratamento. O Centro de Referência da Saúde da Mulher ­ Hospital Pérola Byington implantou a técnica de vitrificação de oócitos em 2010, aprimora os protocolos continuamente e busca melhores taxas de sobrevida, fertilização, clivagem e gestação. Relatamos as duas primeiras gestações, com nascimento, obtidas a partir de oócitos vitrificados em nosso Centro, que comprovam a viabilidade da aplicação dessa técnica e oferecem, assim, atendimento ao público com equidade e gratuidade integral.(AU)

The oocytes cryopreservation contributed substantially to a breakthough in Assisted Human Reproduction techniques over the last three decades. The methodology has been applied in the fertility preservation, through oocyte donation programmes, as strategy to reduce the number of supernumerary embryos cryopreserved by manipulating the least amount of fresh oocytes, and in the accumulation of oocytes in cycles with poor ovarian responders. Assuming the principle that every citizen has the right to health, it is the duty of the State to ensure access to all types of treatment. The Woman's Health Reference Center ­ Pérola Byington Hospital has implemented the technique of oocytes vitrification since 2010, and has been improving our protocol continuously: aiming at improvements in the rates of survival, fertilization, cleavage and pregnancy. We reported the first two pregnancies, infants live born after oocytes vitrification, at our Center, proving the feasibility of the oocytes vitrification protocol applied, offering service to the public with equity and no cost for the patient.(AU)

Técnica de fatiamento do ovário para obtenção de oócitos em cutias (Dasyprocta prymnolopha) / Ovarian slicing technique to obtain oocytes from agoutis (Dasyprocta prymnolopha)

As biotécnicas da reprodução são importantes ferramentas para conservação de espécies domésticas e silvestres, pois permitem a recuperação e uso futuro de material reprodutivo. O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros morfológicos de CCOs de cutias, obtidos pela técnica de fatiamento do ovário para utilização em protocolos de maturação e fecundação na produção in vitro de embriões. Foram utilizadas dezessete cutias fêmeas do NEPAS, CCA- UFPI, com idade e peso médios de 3,9 anos e 2,16Kg, respectivamente, que foram submetidas à ovariossalpingohisterectomia. Os ovários após dissecados e pesados em balança de precisão, foram fatiados individualmente. Procedeu-se a busca e seleção dos CCOs em estereomicroscópio, os quais foram identificados e quantificados por cada ovário, além de classificados quanto a sua morfologia segundo a quantidade de camadas de células do cumulus e ao citoplasma em quatro graus. Verificou-se que a técnica de fatiamento do ovário possibilitou a obtenção de CCOs de cutias, com recuperação de grande quantidade e de variados graus de qualidade. Não houve correlações entre a idade dos animais e o peso dos ovários; a idade e o número de CCOs obtidos; entre o peso das cutias e o peso dos ovários e o número de CCOs obtidos.

The reproductive biotechnologies are important tools for conservation of domestic and wild animal species, because they allow the recovery and future use of reproductive material. The aim of this study was to evaluate morphological parameters of COCs of agoutis obtained by slicing the ovary for using them in maturation and fertilization protocols in vitro production of embryos. Seventeen female agoutis NEPAS, CCA-UFPI, age and weight average of 3.9 years and 2.16 kg, respectively, were underwent ovariossalpingohisterectomy. The ovaries after dissected and weighed on a precision balance were sliced individually. We proceeded the search and selection of COCs in stereomicroscope, which were identified and quantified by each ovary, and classified as to their morphology, by the quantity of layers of cumulus cells and the cytoplasm into four degrees. It has been found that the technique of slicing ovarian possible to obtain agouti COCs with recovery of loads and varying degrees of quality. There was no correlation between age and weight of animal ovaries, age and the number of COCs obtained; between the weight of agoutis and weight of ovaries and the number of COCs obtained.

Oocyte quality of tambaqui (Colossoma macropomum) during the reproductive season / Qualidade ovocitária de tambaqui (Colossoma macropomum) ao longo da estação reprodutiva

The study aimed to analyze the Colossoma macropomum reproductive behavior and quality of the female gametes throughout the reproductive season. The experiment was carried out in Pimenta Bueno - Rondônia State (Northern Brazil) during the reproductive season (2010-2011) using 36 females. Each sampling was performed on a 15 ± 5 days interval. Female gametes were collected by stripping and the following analyses were performed: weight of oocytes released (g); productivity index, fertilization and hatching rate. During the sampling period was verified effect (p < 0.05) of collecting time into the season for oocytes weight, productivity index and fertilization rate. Although the period 3 (December) did not differ significantly from other periods, it showed better parameters for the quality of C. macropomum oocytes.

O estudo foi conduzido com o objetivo de analisar o comportamento reprodutivo da espécie Colossoma macropomum, quanto à qualidade de seus gametas femininos ao longo da estação reprodutiva. O experimento foi executado em Pimenta Bueno-Rondônia durante a estação reprodutiva do C. macropomum. Utilizaram 36 fêmeas durante a estação de 2010-2011. Cada coleta apresentou um intervalo de 15±5 dias. Através da extrusão foram coletados os gametas femininos e realizadas as seguintes análises ao longo da estação: peso de oócitos liberados (g); índice de produtividade; taxa de fertilização e eclosão. Durante a estação 2010-2011 foi verificado efeito (p < 0,05) de período (coleta) dentro da estação para peso de oócitos, índice de produtividade e taxa de fertilização. Apesar do período 3 (coleta – mês de dezembro) não ter diferenciado significativamente de alguns períodos, foi o que apresentou os melhores parâmetros estabelecidos para a qualidade dos oócitos de C. macropomum.

Grb10 characterization in bovine cumulus oocyte complexes from different follicle sizes / Caracterização do Grb10 em complexos cumulus-oócito oriundos de folículos bovino de diferentes tamanhos

The objective of this study was to investigate the mRNA expression and protein localization of Grb10 gene in bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) from different follicle sizes. Firstly, it was investigated the mRNA expression to correlate with maturation rates. COCs from follicles at 1-3, 4-6, 6-8 and >8mm were used to evaluate Grb10 gene expression by qRT-PCR assay and nuclear maturation rates. It was observed that more competent oocytes (from follicles at 6-8 and >8mm; P>0.05), had lower Grb10 mRNA expression levels when compared to the oocytes from follicles at 1-3 and 4-6mm (P>0.05). After it was performed an immunofluorescence analysis in COCs from different follicle sizes (1-3, 4-6, 6-8 and >8mm) to investigate Grb10 protein localization. Samples were incubated with primary antibody: Polyclonal rabbit anti-Grb10 (1:100). Primary antibody was detected using goat anti-rabbit IgG antibody conjugated with Alexa Fluor 488 (1:500). Positive fluorescence signal was detected in all analyzed samples but less evident in COCs from largest follicles. These results characterized Grb10 gene in bovine COC and provide evidences for its involvement during oocyte molecular maturation.

O objetivo deste estudo foi investigar a expressão de RNAm e a localização da proteína Grb10 em complexos cumulusoócito (CCO), oriundos de folículos bovinos em diferentes fases de desenvolvimento. Primeiramente, foi investigada a expressão de RNAm e relacionada com as taxas de maturação. CCOs oriundos de folículos com diâmetro de 1-3, 4-6, 6-8 e >8mm foram utilizados para avaliar a expressão de RNAm por PCR em tempo real e para analisar os estádios de maturação nuclear. Foi observado que os oócitos mais competentes para a progressão meiótica (oriundos de folículos com diâmetro de 6-8 e >8mm; P<0.05) tiveram menor expressão de RNAm para Grb10, quando comparados aos CCOs oriundos de folículos com 1-3 e 4-6mm (P<0.05). Posteriormente, foi realizada a técnica de imunofluorescência em CCOs oriundos de folículos de diferentes tamanhos (1-3, 4-6, 6-8 e >8mm) para investigar a localização da proteína Grb10. As amostras foram incubadas com o anticorpo primário: anti-Grb10 policlonal, produzido em coelho (1:100). O anticorpo primário foi detectado utilizando um anticorpo secundário, IgG anti-coelho, produzido em cabra, conjugado com Alexa Fluor 488 (1:500). A fluorescência foi detectada em todas as amostras analisadas, porém, menos evidente nos CCOs oriundos dos folículos maiores. Os resultados apresentados neste estudo caracterizam o gene Grb10 em CCOs de bovinos e fornecem evidências do seu envolvimento na maturação molecular do oócito.

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.(AU)

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.(AU)

Influence of anestrus and diestrus stages of oocyte on meiotic competence in bitches / Influência das fases de anestro e diestro na competência meiótica oocitária de cadelas

The bitch has reproductive peculiarities that differentiate it from other species. Several experiments have been conducted to establish efficient protocols for maturation; however, the results appear to be unsatisfactory. In this respect, the reproductive female donor should be considered, since it can be a factor of variability of findings in this species. The objective of this study was to evaluate the relationship between the estrous cycle phases phase diestrus and anestrus on canine oocyte in vitro maturation (IVM). The ovaries were transported in sodium chloride 0.9% solution, and were cut into phosphate-buffered saline (PBS) and the cumulus-oocyte complexes (COCs) selected in tissue culture medium (TCM), supplemented with 199 HEPES. A total of 469 grade 1 oocytes were collected from bitches in anestrus and diestrus. These selected oocytes were transferred to the maturation medium for a period of 72 hours, then subjected to hyaluronidase solution and stained with Hoechst 33342 to assess nuclear configuration. The comparison of anestrus and diestrus phase showed no differences (p > 0.05) between the nuclear maturation stages. Thus, the phase of the estrous cycle did not influence the in vitro maturation of canine oocytes, increasing the rates of M-II in this species.

A cadela apresenta particularidades reprodutivas que a diferencia de outras espécies. Diversos experimentos têm sido realizados visando estabelecer protocolos eficientes para a maturação, entretanto os resultados mostram-se insatisfatórios. Nesse aspecto, a fase reprodutiva da fêmea doadora deve ser considerada, já que pode ser um fator de variabilidade dos achados ate então presenciados nessa espécie. O objetivo deste estudo foi avaliar a influencia das fases do ciclo estral (anestro e diestro) na maturação in vitro (MIV) de cadelas. Os ovários foram transportados em solução de cloreto de sódio 0,9% e seccionados em solução salina fosfato tamponado (PBS) e os complexos cumulus-oócito (COCs) selecionados em meio de cultura de tecidos (TCM) 199 suplementado com HEPES. Foram obtidos 469 oócitos grau 1 de cadelas em anestro e diestro. Esses oócitos selecionados foram transferidos para o meio de maturação por um período de 72 horas, sendo posteriormente submetidos a solução de hialuronidase e corados com HOESCHT 33342 para avaliação da configuração nuclear. A comparação das fases de anestro e diestro não revelou diferença (p > 0,05) entre os estágios de maturação nuclear. Dessa maneira, a fase do ciclo estral não influenciou na maturação in vitro de oócitos caninos, incrementando os índices de M-II nesta espécie.